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貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞如何傳代?
發(fā)布時間: 2024-01-16 點擊次數(shù): 587次1.貼壁細(xì)胞如何進行傳代?
去掉原T25培養(yǎng)瓶里面的培養(yǎng)基,T25瓶加3-4 ml PBS洗1-2次;棄PBS,再加1.5 ml的Trypsin-EDTA (1X)消化液消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察,待細(xì)胞變圓,細(xì)胞間隙明顯,部分細(xì)胞剛開始脫離瓶壁,加4 ml左右(血清)細(xì)胞培養(yǎng)液混勻終止消化,將細(xì)胞小心吹打下來,1000 rpm/min室溫離心5min;棄上清,細(xì)胞沉淀用(血清)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:2-1:3,1:3-1:6,1:6-1:8),每T25瓶補足培養(yǎng)基至5-6 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。
2.懸浮性細(xì)胞應(yīng)如何傳代處理?
一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細(xì)胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,將細(xì)胞懸液移入離心管中,1000 rpm/min 室溫離心5 min。棄上清,細(xì)胞沉淀用(血清)細(xì)胞培養(yǎng)液重懸,按要求分瓶(視細(xì)胞密度而定1:4-1:8),每T25瓶加培養(yǎng)液至4-5 ml,37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)。有些懸浮細(xì)胞趨于成團生長,此時細(xì)胞生長狀態(tài)良好,當(dāng)補液時,需避免反復(fù)吹打。
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