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細胞融合的方法及誘導(dǎo)物
發(fā)布時間: 2023-04-19 點擊次數(shù): 1306次同種細胞在培養(yǎng)時2個靠在一起的細胞自發(fā)合并,稱自發(fā)融合;異種間的細胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合,稱誘發(fā)融合。
仙臺病毒法融合
①兩種細胞在一起培養(yǎng),加入病毒,在4℃條件下病毒附著在細胞膜上。并使兩細胞相互凝聚;
②在37℃中,病毒與細胞膜 發(fā)生反應(yīng),細胞膜受到破環(huán),此時需要Ca2+和Mg2+,最適PH為8.0一8.2;
②細胞膜連接部穿通,周邊連接部修復(fù),此時需Ca2+和ATP;
④融合成巨大細胞,仍需ATP 。
聚乙二醇(PEG)法
聚乙二醇(PEG)結(jié)構(gòu)為:HOH2C(CH20CH2)nCH2OH,分子 量大于200小于6000者均可用作細胞融合劑。PEG經(jīng)高壓滅菌后,與溫?zé)岬腅ngle氏液混合。通常用分子 量低于1000的PEG作融合劑最好,50%PEG溶液能產(chǎn)生最多雜交細胞。PEG溶液在pH6.0時細胞融合率最高。
電融合法
在直流電脈沖的誘導(dǎo)下,細胞膜表面的氧化還原電位發(fā)生改變,使異種細胞粘合并發(fā)生質(zhì)膜瞬間破裂,進而質(zhì)膜開始連接,直到閉和成完整的膜,形成融合體。
優(yōu)點:融合率高、重復(fù)性強、對細胞傷害小;
裝置精巧、方法簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像觀察融合過程;
免去PEG誘導(dǎo)后的洗滌過程、誘導(dǎo)過程可控性強。
融合誘導(dǎo)物
細胞融合的誘導(dǎo)物種類很多.常用的主要有生物法用滅活的仙臺病毒(Sendai virus),化學(xué)法如用聚乙二醇(Polyethyleneglycol,PEG)和物理法如電脈沖。目前應(yīng)用比較廣泛的是聚乙二醇,因為它易得、簡便,且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機制尚不全部清楚,它可能引起細胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。動植物 細胞融合方法不同,生物法利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所*的。
自發(fā)條件下或人工誘導(dǎo)下, 兩個不同基因型的細胞或原生質(zhì)體融合形成一個雜的細胞。基本過程包括細胞融合導(dǎo)致異核體(heterokaryon)的形成, 異核體通過細胞有絲分裂導(dǎo)致核的融合, 形成單核的雜的細胞。有性生殖時發(fā)生正常的細胞融合, 即由兩個配子融合成一個合子。
細胞融合不僅可用于基礎(chǔ)研究,而且還有重要的應(yīng)用價值,在植物育種方面已經(jīng)成功的有蘿卜+甘藍、粉藍煙草+郎氏煙草、番茄+馬鈴薯等等。細胞融合另一個重要應(yīng)用就是制備單克隆抗體,單克隆抗體可以用作診斷試劑,治療疾病和運載藥物,具有準(zhǔn)確,高效,簡易,快速等優(yōu)點。
深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。
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