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    哺乳動(dòng)物中制備基因組 DNA 實(shí)驗(yàn)

    發(fā)布時(shí)間： 2021-12-14　　點(diǎn)擊次數(shù)： 831次

    材料與儀器

    動(dòng)物組織
    PBS 乙酸銨 乙醇 酚 氯仿 異戊醇 TE
    離心機(jī) 搖床 研缽

    步驟


    1.  切下組織并立即剪成小塊，置于液氮中凍結(jié)。
     
    2.  將200 mg~1 g 的組織用預(yù)冷的研缽和研杵研碎，或用錘子將其搗為細(xì)粉末，每100 mg 組織用1. 2 ml 消化緩沖液懸浮。
     
    3.  500 g 離心細(xì)胞5 min，棄上請(qǐng)。貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞先用胰酶消化。

    4.  細(xì)胞用1~10 ml 冰冷的PBS重懸，500 g 離心5 min，棄上清，重復(fù)1次。

    5.  用1體積 的消化緩沖液重懸細(xì)胞。
     
    6.  將樣品在蓋緊的管中于50℃搖蕩下溫育12~18 h。
     
    7.  用等體積的酚/氯仿/異戊酵抽提樣品，1 700 g 離心10 min。

    8.  如果樣品溶解得不好， 再加1體積不含蛋白酹K的消化緩沖液，并重復(fù)離心。

    9  如果在界面上有一層厚的白色物質(zhì)，重復(fù)有機(jī)抽提，將上層（水溶液）轉(zhuǎn)移至一個(gè)新管中。
     
    10.  加入1/2體積7.5 ml 乙酸銨和2體積100%乙醉，1 700 g 離心2 min。
     
    11.  用70%乙酵洗滌，晾干，沉淀用TE。

    12.  緩沖液重新溶解，使終濃度在約1 mg/ml 左右。


    注意事項(xiàng)

    1.  如果是用肝組織，要除去膽囊，因其含有高水平的各種消化酶。

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