細胞培養對無菌環境的要求較為嚴格。稍有不慎細胞全軍覆沒，損失慘重。為此保持細胞室的無菌環境尤為重要。細胞培養間的殺菌主要涉及空氣的殺菌和操作臺，培養箱的滅菌，其常見的方法如下。

1、 每天使用細胞房前需提前將層流室及緩沖間紫外燈打開照射30min。
2、 紫外滅菌消毒結束后通風15min，實驗人員方可進入細胞房工作。
3、 進入細胞房前先換專用鞋。
4、 進入緩沖間穿換上專用實驗服。
5、 進入層流室須戴上手套、口罩，消毒后才可以進行實驗。
6、 每間層流室內最多可4個人使用，除實驗外，避免長時間逗留。
7、 實驗操作時盡量避免交談，走動。
8、 始終保持細胞房內外地面、桌面的清潔，物品擺放整齊。
9、 每天工作結束后，需關掉細胞房內不用的儀器、細胞房的燈、空調，離開時鎖好細胞房的門。
10、細胞房內的實驗服、鞋帽禁止穿出實驗室。
11、細胞房內垃圾及時清理，每周對細胞房進行消毒清潔。

1、從培養箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數。
2、培養瓶皿放入培養箱前，可以用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
3、按預定位置擺放培養器皿，方便查找，以免長時間敞開培養箱。
4、普通培養中的細胞，若非實驗需要，每瓶/板細胞每天只需要觀察生長狀態一次。
5、每次從培養箱拿取物品時，注意培養箱的CO2補給情況，及CO2鋼瓶中氣體使用情況。

1、超凈臺使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區消毒，所有物品放入超凈臺內使用前均應消毒。
2、如需點燃酒精燈，需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應占瓶高1/3-2/3。
3、超凈臺中應擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于暫時存放廢棄物，實驗結束后將杯內垃圾倒入水池或垃圾桶中，并沖洗晾干備用。

1、顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。
2、離開細胞房時或較長時間不需使用時，及時關上電源，延長燈泡壽命。盡量避免頻繁開關顯微鏡電源。

1、 細胞房常用消毒劑
1）清潔用水：純凈水
2）消毒劑：

75%乙醇          

0.2% 84消毒液：5L純凈水+10mL84消毒液     

0.2% 新潔爾滅：5L純凈水+10mL新潔爾滅

2、細胞房清潔頻次
1）每周五進行一次清潔、消毒；消毒液要交換使用，每種消毒液使用一個月要更換另一種，防止微生物的耐藥性。
2）如有大物體搬進潔凈區，需要對物體以及物體接觸過的地方進行及時清潔、消毒

3、清潔、消毒程序

1）提前配制2組消毒液，幾塊50cm長的一次性醫用紗布
2）將待清潔區域內廢棄物清理倒掉
3）用一組消毒液+純凈水對門窗、玻璃、墻面、天花板、照明燈（兩次清潔）
4）用另一組消毒液+純凈水依次對細胞室設備、桌面、地面（兩次清潔）
5）清潔用具及時進行清潔，并存放到相應位置，不得隨意亂放
6）紫外照射過夜

4、注意事項
1）清潔時不能干掃或干擦，以免起塵，造成污染
2）燈具清潔后要停數分鐘后啟用電源開關
3）清潔標準為目檢潔凈，無廢物，無印記，無污漬。

如有污染細胞間整體滅菌方法

1、甲醛熏蒸
甲醛是一種高效能化學滅菌劑。不易燃、不爆炸、不腐蝕金屬。它能與蛋白質中的氨基酸結合而使蛋白變性，使酶的活性消失。故有強大的殺菌作用。一般稱作為“大消"，用來對細胞間進行*的消毒殺菌。但是甲醛是一種對人體有害的物質，并且細胞培養實驗室一般空氣流通都很差，甲醛的排出也很慢，至少要一周以上。如果要緊急使用的話，在甲醛滅菌完后，可以用等量的氨水中和空氣中的甲醛。

2、空氣過濾（恒溫恒濕裝置）
這是一種較為安全，殺毒效果也最是好的方法，只是費用較為昂貴。

3、紫外線燈殺菌
紫外線滅菌是用紫外線管照射進行的。波長在220-300nm的紫外線稱為“殺生命區"，其中以260nm的殺菌力*。紫外線作用于細胞DNA，使DNA鏈上相鄰的嘧啶堿形成嘧啶二聚體（如胸腺嘧啶二聚體），抑制了DNA復制。另外，空氣在紫外線照射下可以產生臭氧，臭氧也有一定的殺菌作用。紫外線透過物質的能力很差，適用于空氣及物體表面的滅菌，與被照物的距離以不超過1.2m為宜，照射時間以紫外線燈管的功率大小、被照空間及面積大小，根據滅菌效果測定結果而定。由于上述各種情況的不確定性，導致紫外線殺菌效果不是很理想，一般需要過夜殺菌。此外紫外線對人體有傷害作用，不要在紫外線燈照射下進行操作。

4、電子消毒滅菌器殺菌
即臭氧滅菌。在高壓電場作用下，電子管的內外電極發生強烈電子轟擊，使空氣電離而將空氣中的氧轉換成臭氧。臭氧在常溫、常壓下分子結構不穩定，很快自行分解成氧氣（O2）和單個氧原子（O）；后者具有很強的活性，能同細菌的胞膜及酶蛋白氫硫基進行氧化分解反應，從而靠氧原子的彌漫性擴散達到殺菌之目的，消毒時沒有死角。消毒后空間的殘留的多余氧原子只需30～40min則會自行重新結合成為普通氧原子（O2），不存在任何有毒殘留物，故稱無污染消毒劑，它不但對各種細菌（包括肝炎病毒，大腸桿菌，綠濃桿菌及雜菌等）有*的殺滅能力，而且對殺死霉素也很有效。